Transformasi Pichia pastoris dengan gen fusi CalB-cbm dan ekspresi protein CALB (Candida antartica Lipase B) rekombinan / Heny Rizkiatul Hasanah

Hasanah, Heny Rizkiatul (2020) Transformasi Pichia pastoris dengan gen fusi CalB-cbm dan ekspresi protein CALB (Candida antartica Lipase B) rekombinan / Heny Rizkiatul Hasanah. Diploma thesis, Universitas Negeri Malang.

Full text not available from this repository.

Abstract

RINGKASAN Hasanah, Heny Rizkiatul. 2019. Transformasi Pichia pastoris dengan Gen Fusi CalB-cbm dan Ekspresi Protein CALB (Candida antarctica Lipase B) Rekombinan. Skripsi, Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Negeri Malang. Pembimbing : (1) Dr. Suharti, S.Pd, M.Si1 (2) Dr. Asrul Muhamad Fuad, M.Si2 Kata Kunci : CalB-cbm, pGAP, Pichia pastoris, Transformasi, Ekspresi Enzim lipase (EC 3.1.1.3) merupakan enzim yang memiliki peran penting dalam bioteknologi modern. Gen pengkode enzim lipase telah berhasil dikonstruksi dalam gen fusi CALB-CBM dengan verktor ekspresi PGAP dan di transformasikan ke dalam sel E. coli. Gen fusi tersebut akan dikembangkan dalam skala yang lebih besar dengan cara mentransformasikan gen fusi CALB-CBM menggunakan vektor ekspresi PGAP ke dalam Pichia pastoris sehingga diperoleh protein rekombinan yang dapat dipelajari ekspresinya. Metode yang digunakan untuk integrasi yang stabil dari vektor ekspresi ke genom Pichia pastoris adalah rekombinasi homologus. Secara garis besar, penelitian ini terdiri dari lima tahap. Pertama, gen fusi disiapkan terlebih dahulu dengan cara diisolasi dari E. coli dengan metode alkalyne lysis, dipurifikasi dengan metode ekstraksi mengginakan Choloroform:Isoamylalcohol (CI) dengan perbandingan 1:1 (v/v), dikarakterisasi dengan metode PCR, dipotong dengan enzim restriksi, dan dikuantifikasi menggunakan Nanophotometer. Kedua, sel kompeten Pichia pastoris disiapkan dengan metode modifikasi yang menggunakan larutan Dithiotreitol (DTT) dan gen fusi diintegrasikan ke dalam genom Pichia pastoris menggunakan metode electroporasi. Ketiga, sel transforman diseleksi dengan media yang mengandung zeocin. Keempat, sel transforman dipelajari ekspresinya menggunakan metode gel elektroforesis. Kelima, sel transforman diuji aktifitasnya menggunakan plate assay yang mengandung Rhodamin B dan Tween 80. Hasil dari penelitian ini adalah keberadaan Gen CalB-cbm dalam vektor ekspresi pGAP telah berhasil diisolasi dan diintegrasikan ke dalam genom Pichia pastoris SMD1168H. Protein CALB-CBM telah berhasil diekspresi ekstraseluler dan diamati dengan SDS-PAGE, yang menunjukkan adanya pita pada posisi diantara penanda 45-66,2 kDa. Secara kualitatif sel transforman Pichia pastoris dapat mensekresikan enzim lipase dan menunjukkan aktifitasnya dalam mendegradasi ikatan ester dalam Tween 80, menjadi asam lemak yang ditunjukkan oleh pendaran warna dari Rhodamin B. 1Progam Studi S1 Kimia, Universitas Negeri Malang, Indonesia 2Pusat Penelitian Bioteknologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, IndonesiaRINGKASAN Hasanah, Heny Rizkiatul. 2019. Transformasi Pichia pastoris dengan Gen Fusi CalB-cbm dan Ekspresi Protein CALB (Candida antarctica Lipase B) Rekombinan. Skripsi, Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Negeri Malang. Pembimbing : (1) Dr. Suharti, S.Pd, M.Si1 (2) Dr. Asrul Muhamad Fuad, M.Si2 Kata Kunci : CalB-cbm, pGAP, Pichia pastoris, Transformasi, Ekspresi Enzim lipase (EC 3.1.1.3) merupakan enzim yang memiliki peran penting dalam bioteknologi modern. Gen pengkode enzim lipase telah berhasil dikonstruksi dalam gen fusi CALB-CBM dengan verktor ekspresi PGAP dan di transformasikan ke dalam sel E. coli. Gen fusi tersebut akan dikembangkan dalam skala yang lebih besar dengan cara mentransformasikan gen fusi CALB-CBM menggunakan vektor ekspresi PGAP ke dalam Pichia pastoris sehingga diperoleh protein rekombinan yang dapat dipelajari ekspresinya. Metode yang digunakan untuk integrasi yang stabil dari vektor ekspresi ke genom Pichia pastoris adalah rekombinasi homologus. Secara garis besar, penelitian ini terdiri dari lima tahap. Pertama, gen fusi disiapkan terlebih dahulu dengan cara diisolasi dari E. coli dengan metode alkalyne lysis, dipurifikasi dengan metode ekstraksi mengginakan Choloroform:Isoamylalcohol (CI) dengan perbandingan 1:1 (v/v), dikarakterisasi dengan metode PCR, dipotong dengan enzim restriksi, dan dikuantifikasi menggunakan Nanophotometer. Kedua, sel kompeten Pichia pastoris disiapkan dengan metode modifikasi yang menggunakan larutan Dithiotreitol (DTT) dan gen fusi diintegrasikan ke dalam genom Pichia pastoris menggunakan metode electroporasi. Ketiga, sel transforman diseleksi dengan media yang mengandung zeocin. Keempat, sel transforman dipelajari ekspresinya menggunakan metode gel elektroforesis. Kelima, sel transforman diuji aktifitasnya menggunakan plate assay yang mengandung Rhodamin B dan Tween 80. Hasil dari penelitian ini adalah keberadaan Gen CalB-cbm dalam vektor ekspresi pGAP telah berhasil diisolasi dan diintegrasikan ke dalam genom Pichia pastoris SMD1168H. Protein CALB-CBM telah berhasil diekspresi ekstraseluler dan diamati dengan SDS-PAGE, yang menunjukkan adanya pita pada posisi diantara penanda 45-66,2 kDa. Secara kualitatif sel transforman Pichia pastoris dapat mensekresikan enzim lipase dan menunjukkan aktifitasnya dalam mendegradasi ikatan ester dalam Tween 80, menjadi asam lemak yang ditunjukkan oleh pendaran warna dari Rhodamin B. 1Progam Studi S1 Kimia, Universitas Negeri Malang, Indonesia 2Pusat Penelitian Bioteknologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Indonesia

Item Type: Thesis (Diploma)
Subjects: ?? ??
Divisions: Fakultas Matematika dan IPA (FMIPA) > Jurusan Kimia (KIM) > S1 Kimia
Depositing User: Users 2 not found.
Date Deposited: 21 Jan 2020 04:29
Last Modified: 09 Sep 2020 03:00
URI: http://repository.um.ac.id/id/eprint/94402

Actions (login required)

View Item View Item